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            雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

            簡要描述:雞雞毒支原體(MG)核酸檢測試熒以侵害關節的滑液囊膜及腱鞘為主,引起關節滲出性滑膜炎、腱鞘炎及跗關節和腳墊腫脹[1],此外還會造成生長發育遲緩、胴體降級、產蛋下降等,并且還與呼吸道疾病相關,給養雞業造成巨大經濟損失本試劑盒適用于檢測鼻腔、氣囊組織、鼻腔、食管、氣管、關節滲出物等樣本試劑盒適用于檢測鼻腔、氣囊組織、鼻腔、食管、氣管、關節滲出物等樣本中的雞滑液囊支原體,用于雞毒支原體(M感染的輔助診斷

            • 產  地:上海
            • 廠商性質:經銷商
            • 更新時間:2021-04-29
            • 訪  問  量:226

            詳細介紹

            品牌自營品牌貨號HXG455
            規格50T供貨周期現貨
            主要用途科研使用應用領域生物產業

            滬崢PCR優勢:

                1.   特異性:所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保
            所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測。

                2.   重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證。

                3.   靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。

                4.   實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。

            雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

            通用名稱:雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

            Name  MG  Detection Kit (Real-Time PCR Method)

             【包裝規格】50T/盒

               【預期用途】

            雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)引起雞滑液囊炎,該病是雞的一種急性或慢性傳染病,以侵害關節的滑液囊膜及腱鞘為主,引起關節滲出性滑膜炎、腱鞘炎及跗關節和腳墊腫脹[1],此外還會造成生長發育遲緩、胴體降級、產蛋下降等,并且還與呼吸道疾病相關,給養雞業造成巨大經濟損失[2]。

            本試劑盒適用于檢測鼻腔、氣囊組織、鼻腔、食管、氣管、關節滲出物等樣本中的雞滑液囊支原體,用于雞毒支原體(MG)感染的輔助診斷。

             【檢驗原理】

            本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術,設計一對雞毒支原體(MG)特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR技術對雞毒支原體(MG)核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

            雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)【試劑組成】

            名      稱

              規      格

            酶液

                   50μL×1管

            MDV反應液

                 500μL×2管

            MDV陽性質控品

                  50μL ×1管

            陰性質控品

                 250μL ×1管

             注:

            1)不同批號試劑不能混用。

            2)試劑盒內各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。

            【儲存條件及有效期】

            -20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過5次,有效期12個月。

             適用儀器】

            ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

             標本采集】

                病死或撲殺禽,從鼻腔、氣管或氣囊、關節滲出物;活禽取鼻腔、食管、氣管拭子、注射器穿刺吸取關節液

             【保存和運輸】

            上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

            雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)【使用方法】

            樣本前處理

            組織樣品:每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g,手術剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;液體樣品,直接取100μL提取

             DNA提取

            • DNA的提取也可以采用(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

             試劑配制(試劑準備區)

            根據待檢測樣本總數,設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照;樣品每滿7份,多配制1份),每測試反應體系配制如下表:

            試劑

            MDV反應液

            酶液

            用量(樣本數為N)

            20μL

            1μL

             將混合好的測試反應液分裝到PCR反應管中,21uL/管。

             加樣(樣本處理區)

            將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

             PCR擴增(核酸擴增區)

            • 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;
            • 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25μL;

            熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。

            • 推薦循環參數設置:

            步驟

            循環數

            溫度

            時間

            收集熒光信號

            1

            1 cycle

            95℃

            10min

            2

            40 cycles

            94℃

            15sec

            55℃

            30sec

            結果分析判定

            設置BaselineThreshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節Baselinestart值(一般可在3~15范圍內調節)、stop值(一般可在5~20范圍內調節),以及Threshold的Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

            結果判斷

            陽性:檢測通道Ct值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;

            可疑:檢測通道35<Ct值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為35<Ct值≤38,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

            陰性:樣本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

            質控標準

            陰性質控品:Ct>38或無Ct值顯示;

            陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且Ct值≤32;

            以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

             檢測方法的局限性

            • 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
            • 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;
            • 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
            • 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;
            • 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
            • 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;
            • 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

             注意事項】

            • 所有操作嚴格按照說明書進行;
            • 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;
            • 反應液應避光保存;
            • 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
            • 使用一次性吸頭、一次性手套和各區工作服;
            • 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;
            • 實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
            • 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

             

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